原理
慢病毒系统是理想的可以在多种细胞类型(如原代细胞、干细胞和非分裂细胞)中实现可重复的稳定表达的基因表达工具。对于难转染的细胞而言,采用病毒递送外源基因的方式是非常有效的选择。慢病毒通过顺式作用元件将病毒运送到细胞核,并将要表达的基因序列整合到细胞的基因组中。采用慢病毒可以得到持续稳定的高表达。采用慢病毒系统进行高滴度的复制缺陷型慢病毒颗粒的生产,从而可以有效转导几乎所有分裂和非分裂细胞类型。
服务流程
1.客户提供:含有目标基因的质粒(提供测序图谱)或所要表达的目的基因的名称,序列;所需要的病毒滴度及总量,病毒是否需要纯化;若需要检测外源基因的表达,如需要请提供相应的抗体
2.含目的基因的慢病毒载体的构建和纯化提取
3.慢病毒表达载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞;
4.培养48-72h,收集培养上清;
5.病毒的纯化和浓缩;
6.滴度测定、目的基因检定
7.将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞,筛选混合稳定细胞株,并检测靶基因的表达。
8.鼎博提供:提供重组后的慢病毒载体质粒,并附上对目的基因的PCR鉴定结果;提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的慢病毒储存液
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